白癜风噬菌体抗体库构建成功(邓宁的学术简介)

白癜风噬菌体抗体库构建成功

近日，第四军医大学西京医院皮肤科刘玲硕士等在完成的一项国家自然科学基金资助课题中，采用细胞内PCR扩增抗体基因的方法，成功构建一库容量为3×106白癜风的噬菌体抗体库。该抗体库的建立，为进一步研究自身抗体在白癜风发生发展过程中的作用及其治疗提供了崭新的思路。

据介绍，白癜风是一种常见的皮肤色素脱失性疾病。近年来有研究表明，白癜风与自身免疫密切相关，其患者体内存在抗黑素细胞膜自身抗体，导致黑素细胞破坏，引起自身损伤。然而，对于“自身抗体在疾病发生发展中究竟是始动因素还是继发反应”这一问题一直存在争议。

为探讨自身抗体机制的新思路，刘玲等研究人员采用细胞内PCR扩增的方法，选择100例（男48例，女52例，平均年龄21岁，平均病程两个月）进展期白癜风患者血样，通过PCR1反转录、扩增轻链和重链可变区基因、Cre重组酶介导、单个细胞内轻重连接获取体内原始配对信息，以及经振荡筛选等系列技术处理后，成功地构建出一库容量为3×106的白癜风噬菌体抗体库。

该抗体库经抗体表达、特异性检测及吸附筛选等检验，结果显示：细胞内PCR扩增ScFv基因，目的条带为800bp，与预期大小相符；取20个单菌落提取质粒进行凝胶电泳，19个可见800bp目的条带，重组率达95%。通过4轮“亲和吸附-洗脱-扩增”筛选，特异性噬菌体抗体回收率增加约67倍，并获得1株特异性针对黑素细胞膜抗原的抗体。提示抗体库具有重组率高、特异性强、亲和力好、抗体基因信息准确等特点。

研究人员认为，细胞内PCR技术，是一种全新的扩增抗体可变区基因方法，它在同一个载体上的轻链与重链的配对，不是人工随机组合，而是在体内的原始配对，从人免疫细胞中扩增体内亲本配对的单链抗体可变区基因，克隆到噬菌体载体，同时利用完整细胞筛选特异性针对黑素细胞膜抗原的自身抗体，从而得到编码疾病相关抗体基因的准确信息。采用该技术能从分子水平上阐述自身抗体的产生机制、编码基因规律及基因突变特点。

邓宁的学术简介

研究方向：教学方面：目前为止招收生物化学与分子生物学专业 免疫化学与分子免疫学方向博士和硕士研究生；免疫学专业 抗体技术及应用方向硕士研究生。为本科生和研究生开设了细胞生物学，动物细胞工程和抗体工程等课程。主持动物细胞工程校级精品课程建设，指导郁颖等同学的“挑战杯”作品获广东省第九届“挑战杯”大学生科技作品竞赛三等奖。科研方面： 主持了国家“863”项目、国家自然科学基金、教育部科学技术研究重点项目，广东省自然科学基金和广州市科技攻关重点项目等科研课题。申报国家发明专利6项，在国内外学术期刊发表研究论文50 余篇。主要研究方向围绕基因工程抗体与抗体药物开发，肿瘤多肽疫苗，肿瘤干细胞等开展研究。开展了抗体库的构建、人源抗体的筛选；抗体亲和力成熟和抗体的人源化改造；抗体的高效表达和纯化技术平台建立等。开展了bFGF单克隆抗体的抑制肿瘤作用研究，进一步开展抗体药物研究。开展了抑制肿瘤血管新生的多肽疫苗的研究等，建立了抑制肿瘤血管生长的细胞模型和小鼠动物模型。探讨了VEGF/bFGF多肽疫苗在肿瘤血管新生和抑制肿瘤生长转移的作用等。主要论文：bFGF 与VEGF 抗原表位筛选及复合肽的表达鉴定.2010，26（8）:688-693bFGF单克隆抗体抑制小鼠Lewis肺癌转移及血管新生. 《中国癌症杂志》2010, 20(6): 401-405嵌合内含子对抗bFGF抗体基因在293T细胞中表达的影响. 中国生物工程杂志　2010, 30 (3) : 9-14 血管内皮细胞生长因子表位肽体外抗肿瘤作用研究. 中国免疫学杂志, 2010, 26(5):, 407-412bFGF 单抗与顺铂体外联合抑制黑色素瘤B16 细胞增殖效应的研究. 中华肿瘤防治杂志2010, 17 (1): 1-4 　VEGF189基因合成、原核表达及鉴定. 免疫学杂志, 2009, 25,(4):469-472重组VEGF2A189 发酵、纯化及鉴定. 暨南大学学报(自然科学版).2009, 30(5):560-565苏丹红Ⅰ、Ⅲ和对位红竞争ELISA检测方法的初步建立, 食品科学, ,2008年 8月，29（8）：523-525人bFGF 单克隆抗体的制备及MabF7 对黑色素瘤B16 的体外抗瘤效应。中华肿瘤防治杂志，2008，15（1）：19-22bFGF人源性抗体Fab段基因克隆及其在大肠杆菌中的表达，免疫学杂志，2007，23(6): 598-601重组人bFGF单克隆抗体可变区基因克隆及单链抗体的构建和表达. 细胞与分子免疫学杂志，2007，23（12）：1150-1153（邓宁通讯作者）bFGF反义硫代核苷酸增强人喉癌Hep2细胞的化疗敏感性。中国肿瘤生物治疗杂志，2007， 14（5）：461-465VEGF受体结合抑制肽的重组表达与活性分析，中华微生物学和免疫学杂志，2007，27（3）：263人噬菌体抗体库的构建及人源性抗bFGF抗体的筛选，免疫学杂志，2006，22（4）：451-454 (邓宁通讯作者)bFGF mRNA、bFGF及FGFR1与神经胶质细胞恶性行为的相关性 ，中国免疫学杂志，2006，22（5）：440-444自身免疫性患者血清中抗bFGF自身抗体的检测，细胞与分子免疫学杂志，2005， 21（5）：625-627人工合成VEGF表位模拟7肽的生物学功能研究, 细胞与分子免疫学杂志，2005，21（1）：37-38

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