完成机构:中国农业科学院茶叶研究所茶树资源与改良研究中心,国家茶树改良中心,杭州310008
1、一般是通过设计软件,例如oligo6,primer5等,你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明,是比较容易的。我一般用DANMAN设计引物,这个软件操作简单,占用资源也小。
至于设计引物的一般原则如下:
* 序列选取应在基因的保守区段
* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对,避免引物自身形成环状发卡结构
* 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长,保证序列独特性,并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交,降低了特异性,而且比短序列杂交慢,从而降低了产量。
* Tm值在55-65℃(因为60℃核酸外切酶活性最高),GC含量在40%-60%
* 引物之间的TM相差避免超过2℃
* 引物的3’端避免使用碱基A,引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基
* 为避免的扩增,引物设计最好能跨两个外显子。
* Taqman探针PCR要求片段长度在80bp-150bp
* 引物末端(最后5个核苷酸)不能有超过2个的G和C。
2、设计引物的时候你也顺带设计了酶切,那么就可以通过PCR扩增你的目的基因,然后通过双酶切获得大量目的基因。
后续试验要根据你需要此基因做什么研究来看了,不同研究选用不同的表达载体,不同实验需求是不同的,这个建议你跟你们实验室的其他人商量或者询问老师,希望这些能帮到你!
纵观各领域焦点文献,不难发现,目前研究者们主要采用四种组装策略:
第一种策略 是依赖于亲本序列进行高效组装的Trio-binning[1](Illumina+PacBio)法。这种方法虽简便易行,但在亲本为杂合子时易出现reads的错误划分;
第二种策略 是不依赖亲本序列,结合Hi-C数据,产出染色体级别单倍型的DipAsm[2](HiFi+Hi-C)法,但对高度杂合区域易出现错误划分;
第三种策略 是有效利用HiFi reads生成高质量单倍体的Hifiasm[3]法,与DipAsm相比,Hifiasm不仅保持了不依赖亲本从头组装的优势,还降低了对Hi-C数据的依赖性,简化了流程,一键式实现组装和定相,且可整合Hi-C数据帮助挂载,正逐渐成为高质量组装的首选方法;
第四种策略 是多倍体组装策略——PolyGembler[4]或nPhase[5]法。其中前者分型需要提供家系数据,后者需要提供参考基因组序列。
由此可见,异源多倍体单倍型分型原则上需提供亲本序列,若不能提供,至少要提供其进化上的祖先种/近似祖先种序列(用于比对来拆分不同的亚基因组),并在后期帮助挂载。到此,单倍型组装的主流策略已介绍完毕,细心的你更青睐哪种策略呢?
虽然大家已经对单倍型组装策略有了一定了解,但我们仍需再趁热打铁一把,继续从文章分析内容出发,深入了解下单倍型基因组的研究思路!
一、研究背景
茶是一种极为重要的经济作物,含有多种被认为对人体健康有益的多酚化合物。茶树是无性繁殖农艺作物,这种无性繁殖能有效地保持有价值的基因型,避免其因分离或有性重组而丢失。同时无性繁殖也容易导致作物积累有害突变,造成植物突变负荷升高。个体中高水平的有害突变最终会降低相对适合度,从而降低农艺表现。目前关于茶的遗传负荷响应机制尚不清楚。本研究将通过组装茶单倍型基因组,对等位基因特异性表达进行分析,并结合全基因组重测序数据对群体遗传进化进行分析,以预测对茶树驯化育种具重要价值的分子机制。
二、材料方法
PacBio+Illumina+Hi-C组合测序策略。以1个铁观音(TGY)个体为样本,结合129个全基因组重测序数据和近期发表的61个非冗余全基因组重测序资料构建了一个完整的数据集。
三、主要结果
1.铁观音单倍型基因组组装
TGY的基因组大小约为3.15 Gb,杂合度为2.31%。文章首先使用PacBio长序列对初始contigs进行组装,随后使用Illumina短序列进行纠正,获得了大小为5.41 Gb的基因组,表明整个基因组具有高杂合度。接着,文章对杂合序列使用Khaper程序进行处理,得到大小为3.06 Gb的嵌合式基因组,此时contig N50为1.94 Mb,BUSCO完整性评估结果为93.7%。最后,文章利用TGY基因组的高杂合性,使用ALLHiC和Canu进行单倍型拆分和定相,从而产生15对假染色体和5.98 Gb的锚定序列。共线性分析结果显示:两种单倍型的基因序列高度一致。同时对单倍型间序列差异进行分析,发现两种单倍型之间序列的重叠率为98.3%。
2. 铁观音单倍型基因组与茶树基因组变异研究
文章首先对单倍型基因组进行选择压力分析,发现86.9%的等位基因对包含至少一个非同义替换。这些差异表明,TGY单倍型基因组对揭示等位基因结构和功能差异具参考意义。随后文章对不同组织中等位基因表达情况进行分析,发现大多数等位基因的表达模式是一致的,例如单倍型B的CsSRC2基因在第二个外显子中具有两个3-bp的插入和一个78-bp的缺失,引入了两个额外的氨基酸(赖氨酸和天冬酰胺)和蛋白质序列中26个氨基酸的去除。而在单倍型A中也检测到一个非同义突变,使氨基酸由谷氨酰胺变为组氨酸。对CsSRC2进行转录表达水平分析,结果显示,在不同组织中CsSRC2等位基因表达模式一致。另外,文章还发现了386个在组织中表达有差异的等位基因,其中几个基因与挥发性有机化合物的生物合成有关,包括黄酮、黄酮醇和萜类化合物。随后文章对等位基因差异表达(ASE)结果进行统计,发现在14,691个基因中,有4,423个基因(30.1%)在茶叶中表现出显著的ASE。同时在6个组织中有1,528个基因偏向于一个等位基因的表达,这些基因通常与核糖体、自噬作用、转录因子和剪接体等多种生物学过程相关,提示减少有害突变的关键因子可能与基本生物功能中差异表达的基因相关联。
文章又收集了129份茶树材料和已发表的61份重测序茶树样品,进行了全基因组重测序,分析确定了9,407,149个SNPs和829,388个小Indels (< 10 bp)。文章接着利用496,448个单拷贝基因的SNPs进行系统发育分析,结果显示茶树主要分成3个类群:C. taliensis、C. sinensis var. sinensis(CSS)和C. sinensis var. assamica(CSA)。使用SplitsTree和TreeMix进行分析,结果显示茶树系统发育关系网络复杂,且茶树群体之间存在显著的基因交换。文章最后对CSA和CSS驯化基因进行分析,发现两个品种具有不同的芳香化合物、株高和耐寒性等特点,可能与驯化过程中人工选择作用相关。
四、研究结论
该研究清楚地表明现代栽培品种种内和种间基因渐渗对遗传多样性的贡献,为茶树的进化历史提供了遗传学和分子生物学方面的见解。同时,该研究表明,PacBio+Illumina+Hi-C测序技术可以助力准确单倍型基因组组装,为分析变异与驯化机制提供基因组资源。
一、研究背景
荔枝是重要的热带水果,在20多个国家都有种植,其突出的营养成分和诱人的颜色,使其成为国际市场上具有吸引力的热带或亚热带水果之一。依据果实成熟期差异,荔枝品种可分为极早熟品种(EEMC)、中早熟品种(EMC)和晚熟品种(LMC)。果实品质较好的品种通常归属于LMC类群,而EEMC类群的品种数量较少,生产价值较低。然而造成荔枝品种差异的分子机制尚不清楚。研究荔枝基因组的结构和进化对促进荔枝及无患子科近缘植株的遗传改良具重要价值。
二、材料方法
PacBio+Illumina +Hi-C+10x Genomics组合测序策略。以妃子笑为高质量参考基因组,结合72份野生或栽培种质全基因组重测序资料构建数据集。
三、主要结果
1. 妃子笑单倍型基因组组装
妃子笑的初始组装基因组大小为962Mb,基因组杂合度2.27%。文章使用流式细胞仪或Survey方法评估基因组大小约为500或460Mb,说明初始组装版本包含两套染色体信息。所以文章首先使用HaploMerger2进行单倍型分型,选择与流式预估大小相近的基因组结合Hi-C数据进行挂载,得到了15条假染色体(pseudochromosomes),大小为470Mb,BUSCO评估结果为96.2%。由于妃子笑基因组具高杂合度,使得文章能够接着利用 SNPs的reads分型组装方法和10x Genomics测序数据,成功组装出妃子笑的两个单倍型基因组,然后利用不同群体材料全基因组重测序数据与15对染色体序列进行比对,根据覆盖度的差异获得了云南单倍型(HY,450M)基因组和海南单倍型(HH,455M)基因组,指明了妃子笑基因组的来源。最后文章对获得的单倍型进行了准确性的分析,发现HY和HH基因组序列之间总SNPs的平均杂合度为2.38%,与k-mer估计值2.27%相似,说明此次单倍型分型是准确的。
2. 荔枝全基因组复制事件和变异分析
生成单倍型基因组后,文章首先对荔枝基因组进行了全基因组复制事件(WGD)分析,发现荔枝仅发生过核心双子叶植物共有的全基因组三倍化事件,说明以荔枝为代表的无患子科近期没有发生WGD。随后,文章又收集了34份野生荔枝品种和38份栽培荔枝品种进行全基因组重测序分析,共鉴定出80,235,643个变异,为荔枝的遗传驯化研究提供参考。
3. 荔枝基因组等位基因差异表达分析
由于荔枝基因组中相关等位基因差异表达可能对其生长和进化产生深远影响。文章继续对35个荔枝样品中等位基因表达情况进行分析,发现约14,000个差异等位基因(DEAs)处于稳定差异表达状态。随后文章继续对妃子笑荔枝样品中等位基因表达情况进行分析,确定了13,517个DEAs。接着文章对DEAs分布区域进行汇总,发现这些DEAs在某些基因组区域中高度富集,例如,许多DEAs积聚在5号染色体的3′端。同时,文章发现与非差异表达的等位基因(EEAs)相比,DEAs的启动子、内含子以及3'UTR和5'UTR具有更高的SNPs密度,这表明DEAs表达量的差异可能与转录因子和启动子区的序列变异有关。最后文章对不同区域SNPs密度进行分析,发现外显子中的SNPs密度显著低于其他区域(例如,外显子与启动子的差异为1.47倍),同时对于这些外显子SNPs,转换比颠换更为普遍,且多数是非同义的。因此,文章推测DEAs的两个等位基因可能具不同功能,导致其对突变的耐受性较低。
为了剖析荔枝果实成熟的调控网络,文章使用72个种质进行了全基因组关联分析(GWAS),发现一个开花相关基因(LITCHI019307)在荔枝中具差异表达。接着文章对不同品种基因结构进行分析,发现HY基因组中鉴定到的3.7 kb缺失片段可能有助于解释荔枝种质之间COL307差异表达和开花时间差异。
四、研究结论
该研究通过PacBio+Illumina+Hi-C+10x Genomics测序技术,结合全基因组重测序数据,助力准确单倍型基因组组装,并对等位基因在不同组织中差异表达情况进行分析,为利用变异助力驯化机制提供基因组与转录本资源。同时结合全基因组关联分析,为分子育种和基因组选择提供了理想的靶标,为培育多样化荔枝品种提供参考。
一、研究背景
生姜,广泛的药用植物和香料之一,是许多国家传统药用系统中最著名的非处方药之一。目前全球有超过39个国家在种植生姜,中国和印度是两个生姜生产大国。FAO的数据显示,2019年全球生姜产量为408万吨,是世界贸易中具重要经济价值的植物。同时生姜中具有多种生物活性化合物。其中,姜辣素依据其药理特性,被认为是生姜中最重要的药用化合物。然而,在姜属中,迄今为止只有叶绿体基因组序列已公布,可用来进行代谢相关研究的高质量基因组组装研究仍未开展,这种基因组资源的缺乏严重阻碍了人们对生姜基因组进化和姜辣素生物合成途径的理解。本研究将通过获得生姜高质量基因组与拆分单倍型基因组,进一步揭示生姜生物学和育种相关内容,并为物种特异性姜辣素生物合成途径提供依据。
二、材料方法
PacBio+Illumina +Hi-C组合测序策略。
三、主要结果
1. 生姜高质量基因组和单倍型基因组组装
为了对生姜的基因组大小进行评估,文章进行了k-mer分析,结果表明生姜基因组大小约为1.59 Gb,杂合度为3.6%。文章使用Illumina、PacBio和Hi-C测序数据,对生姜" Zhugen "(2n = 2x = 22)基因组进行组装。首先文章使用Falcon软件进行基因组contigs的从头组装,并使用Falcon phase进行定相。然后文章用Arrow抛光contigs并用Pilon校正。得到单倍型1和单倍型0。最后文章使用Hi-C数据辅助挂载,并获得了两套染色体水平的单倍型基因组,其中单倍型1的基因组大小为1.53 Gb,包含669个contigs(N50为4.68 Mb)。而单倍型0的基因组大小为1.51 Gb,具有636个contigs(N50为5.28 Mb)。
2. 生姜单倍型基因组间的比较分析和等位基因差异表达分析
文章使用PacBio长序列验证单倍型1和单倍型0。发现PacBio长序列和单倍型1之间有97.95%的重叠,与单倍型0有98.1%的重叠,而两种单倍型之间的杂合率为3.78%,与k-mer分析一致,表明单倍型间的分相是精确的。为了进一步了解单倍型间的差异,文章继续对两种单倍型的选择压力进行分析,发现二者单拷贝基因的Ka / Ks比率是一致的,这意味着两种单倍型在生姜的驯化历史中经历了相似的选择压力。此外,文章通过共线性分析在两种单倍型之间共鉴定到了57个主要共线性块,且包含12个反转,表明单倍型间仍存在差异。随后文章继续对两种单倍型间的同源基因进行分析,共鉴定到了55,635个同源基因(占所有注释基因的72.0%)。然后文章进一步对两种单倍型的17,226个等位基因对的特征进行分析,发现大部分等位基因在染色体上的分布模式相似,且这些等位基因的表达水平在单倍型之间没有显著差异。但是有2,055个基因对(11.9%)表现出等位基因之间的差异表达,且这些差异位点主要在代谢途径中富集。
为了进一步揭示生姜生物代谢路径中的关键因子,文章对不同发育阶段生姜根和茎中的差异表达基因(DEGs)进行分析,发现不同发育阶段生姜根茎中共6,690个基因呈现显著下调表达趋势,773个基因上调。而转录组学和代谢物相关性分析表明,不同发育阶段组织中部分基因家族的表达模式与姜辣素和姜黄素的积累程度相关。
四、研究结论
该研究通过PacBio+Illumina+Hi-C组合测序技术助力准确单倍型基因组组装,并对单倍型间差异进行了细致区分。随后,结合比较基因组,对生姜基因组进化情况进行研究;并结合转录组学和代谢组学对在不同发育阶段组织中等位基因差异表达情况和代谢物含量进行关联分析,分析了姜辣素生物合成基因家族成员之间的相关性,并提出了姜辣素类似物的骨架生物合成途径,为了解生姜代谢奠定了基础。
上述内容均显示,单倍型基因组是结合变异与差异表达分析的重要突破口,同时也是后续实现优质分析的先决条件。对分析内容进行总结后,不难发现,单倍型基因组与全基因组重测序相结合的研究方法可以为高水平文章的问世提供更多分析内容与保障。
参考文献
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黄酮苷(Flavone glycosides)是一种茶多酚物质,属黄酮类。黄酮类化合物是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮(flavone)结构的化合物。它们分子中有一个酮式羰基,第一位上的氧原子具碱性,能与强酸成盐,其羟基衍生物多具黄色,故又称黄碱素或黄酮。
黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类,小部分以游离态(苷元)的形式存在。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物,它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方起着重要的作用。
扩展资料:
化学性质
1、水解反应
在制茶过程中,黄酮苷在热和酶的作用下会发生水解,脱去苷类配基变成黄酮或黄酮醇,在一定程度上降低了苷类物质的苦味。
2、吸收光谱
不同结构的黄酮类化合物具有不同的吸收光谱。 但吸收峰大都在240-270nm和335-380nm之间。
3、显色反应
黄酮及黄酮醇类可与浓硫酸、三氯化铝反应呈现出一定的颜色。
近年来,由于自由基生命科学的进展,使具有很强的抗氧化和消除自由基作用的类黄酮受到空前的重视。类黄酮参与了磷酸与花生四烯酸的代谢、蛋白质的磷酸化、钙离子的转移、自由基的清除、抗氧化活力的增强、氧化还原作用、螯合作用和基因的表达。
参考资料来源:百度百科--黄酮苷
第一章 概论1
一、基因工程的概念与基本步骤1
二、基因工程技术的发展历程2
三、基因工程的研究内容5
第二章 基因与基因表达调控7
第一节 基因的结构与功能7
一、基因的分子基础7
二、结构基因的基本结构8
三、原核生物基因结构与调控模式8
四、真核生物基因结构与调控模式9
五、特殊结构与功能的基因11
第二节 基因组的结构与功能13
一、病毒基因组的结构与功能特点13
二、原核生物基因组的结构与功能特点14
三、真核生物基因组的结构与功能特点15
四、线粒体基因组15
五、人类基因组16
第三节 基因的表达与调控17
一、基因表达调控的(基本)原理18
二、原核生物的基因表达调控20
三、真核生物的基因表达调控24
本章小结29
思考题30
第三章 核酸的分离与分析31
第一节 核酸的分离纯化31
一、核酸分离提取的原则与要求31
二、核酸提取的主要步骤31
三、质粒DNA的分离纯化33
四、基因组DNA的制备35
五、RNA的提取35
六、核酸的定量36
第二节 核酸的凝胶电泳37
一、琼脂糖凝胶电泳37
二、聚丙烯酰胺凝胶电泳38
三、凝胶电泳分离后核酸片段的回收及纯化39
第三节 聚合酶链式反应(PCR)40
一、PCR技术的基本原理及特点40
二、PCR反应体系与条件优化42
三、PCR技术拓展与应用45
第四节 核酸分子杂交技术47
一、核酸杂交的原理47
二、核酸探针的制备47
三、核酸杂交种类与方法53
本章小结59
思考题59
第四章 核酸分子的酶切、连接和修饰61
第一节 DNA分子的酶切61
一、限制性核酸内切酶61
二、限制性内切酶切割DNA的方法64
三、影响限制性内切酶活性的因素66
四、DNA酶切的应用68
第二节 DNA分子的连接68
一、连接酶69
二、黏性末端DNA片段的连接70
三、平末端DNA片段的连接70
四、影响连接反应的因素72
第三节 DNA分子的修饰73
一、DNA修饰酶73
二、T4多聚核苷酸激酶对DNA的修饰作用74
三、碱性磷酸酶对DNA的修饰作用75
本章小结75
思考题76
第五章 基因工程载体77
第一节 质粒载体77
一、质粒的一般生物学特性77
二、理想质粒载体的必备条件78
三、常用的质粒载体79
第二节 噬菌体载体82
一、噬菌体载体的生物学特性82
二、λ噬菌体载体83
第三节 其他载体88
一、酵母载体89
二、人工染色体载体91
第四节 表达载体94
一、原核表达载体94
二、真核表达载体95
本章小结100
思考题101
第六章 目的基因克隆102
第一节 PCR扩增法获得目的基因102
一、RT?PCR法102
二、其他PCR法104
第二节 基因的合成109
一、DNA合成的原理109
二、人工合成基因110
第三节 基因组DNA的克隆112
一、基因组文库的构建和检测112
二、大片断文库在环境基因组中的应用115
第四节 cDNA文库构建及筛选116
一、RNA提取与质量鉴定116
二、cDNA文库构建119
三、cDNA文库的质量评价120
第五节 差异克隆技术121
一、mRNA差异显示技术(DDRT-PCR)121
二、抑制性差减杂交123
第六节 DNA诱变124
一、定点突变125
二、随机突变128
第七节 转化、筛选与鉴定129
一、重组DNA导入受体细胞129
二、重组子的筛选与鉴定133
三、DNA序列测定136
本章小结139
思考题140
第七章 原核细胞基因工程141
第一节 原核表达体系141
一、宿主菌141
二、原核表达载体143
三、密码子偏好148
四、质粒拷贝数149
第二节 原核表达策略149
一、包含体型表达149
二、分泌型表达150
三、融合型表达150
四、其他表达151
第三节 基因工程菌的大规模培养152
一、基因工程菌发酵的特点152
二、基因工程菌的深层培养方式153
三、相关发酵的反应器155
第四节 原核表达产物的分离纯化156
一、分离纯化的目标与策略156
二、分离纯化的一般过程158
三、包含体的溶解和重组蛋白的复性160
四、分泌蛋白质的浓缩161
第五节 基因工程菌不稳定性及对策162
一、基因工程菌不稳定性产生的原因162
二、改善基因工程菌不稳定性的方法163
第六节 原核表达应用举例165
本章小结166
思考题166
第八章 酵母基因工程168
第一节 酵母基因工程表达体系168
一、酵母基因表达宿主系统168
二、酵母表达载体171
三、转化方法173
第二节 常见酵母基因表达系统174
一、酿酒酵母表达系统174
二、毕赤酵母表达系统176
第三节 影响外源基因表达的因素179
一、转录水平控制179
二、表达载体的拷贝数和稳定性179
三、其他因素180
四、酵母表达系统的新的应用方向180
第四节 酵母基因工程应用举例181
一、利用重组酵母生产乙肝疫苗181
二、利用重组酵母生产人血清白蛋白182
本章小结183
思考题183
第九章 动物基因工程184
第一节 动物细胞基因工程184
一、动物细胞表达体系184
二、动物细胞表达载体的构建与优化188
三、动物细胞转化方法与筛选191
第二节 转基因动物194
一、转基因动物概念194
二、哺乳动物的转基因操作194
三、外源基因的整合与表达199
第三节 动物转基因技术的应用前景202
一、基因功能的研究202
二、在农业上的应用203
三、在医学上的应用204
本章小结205
思考题206
第十章 植物基因工程207
第一节 植物基因工程中的转基因受体207
一、高等植物的遗传学特性207
二、愈伤组织受体系统208
三、原生质体209
四、种质受体系统209
五、胚状体受体系统210
六、直接分化芽受体系统210
第二节 植物基因工程载体210
一、植物基因工程载体的种类和特性210
二、植物基因工程载体的构建211
第三节 高等植物基因的表达系统215
一、外源基因的四环素诱导系统215
二、外源基因的乙醇诱导系统216
三、外源基因的类固醇诱导系统217
第四节 植物转基因方法218
一、根癌农杆菌介导法218
二、基因枪法220
三、花粉管通道法222
四、其他转基因方法223
第五节 转基因植物筛选与鉴定225
一、生物学筛选225
二、标记基因的表达检测225
三、目的基因及其表达的分子鉴定227
第六节 植物基因工程应用举例228
一、基因工程生产转基因黄金水稻228
二、抗虫害的转基因植物228
三、抗除草剂植物的育种229
本章小结229
思考题230
第十一章 基因工程相关新技术231
第一节 生物信息学231
一、生物信息学概述231
二、生物信息学数据库231
三、生物信息的检索及策略232
四、序列比对分析232
五、核酸序列分析234
六、蛋白质结构分析236
第二节 芯片技术238
一、基因芯片的原理238
二、基因芯片的种类238
三、基因芯片制作技术的基本步骤240
四、基因芯片技术的应用241
第三节 蛋白质组学与酵母双杂交242
一、蛋白质组学242
二、酵母双杂交245
本章小结247
思考题247
第十二章 重组DNA技术的应用248
第一节 DNA与疾病诊断248
一、基因诊断的含义248
二、基因诊断的原理及特点249
三、基因诊断的方法249
四、基因诊断的应用252
五、问题及展望254
第二节 疾病的基因治疗254
一、基因治疗的概念及内容255
二、基因治疗的分子机制255
三、载体系统256
四、基因治疗的策略与方法256
五、疾病的基因治疗示例257
六、问题及展望259
第三节 传染病的防治259
一、新发和再发传染病的特征260
二、传染病防治的新策略及研究内容260
三、基因工程疫苗261
四、基因工程抗体264
五、DNA重组技术在传染病防治中应用的前景与展望264
第四节 蛋白质工程265
一、蛋白质工程的概念与研究内容265
二、蛋白质工程分子设计的理性策略266
三、蛋白质定向改造的方法266
四、蛋白质工程的应用266
五、蛋白质工程前景与展望268
第五节 途径工程268
一、途径工程的基本概念268
二、途径工程的基本原理269
三、途径工程的基本过程269
四、途径工程的研究内容270
五、途径工程前景及展望272
本章小结272
思考题272
第十三章 基因工程产品的管理、专利及安全性273
第一节 实验室管理要求273
一、实验室生物安全管理的概念和依据273
二、实验室生物安全管理的硬件要求274
三、一般实验室的基本生物安全规程275
第二节 基因工程产品的释放、管理与要求275
一、基因工程产品的释放275
二、基因工程产品的管理277
三、基因工程产品的管理要求与具体措施278
第三节 专利管理280
一、基因工程产品的专利保护的必要性280
二、基因工程产品专利保护的争议281
三、对基因产品实现专利保护的条件——三性要求283
本章小结284
思考题284
索引285
参考文献288
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