我国最大体细胞克隆项目通过科技成果鉴定

我国最大体细胞克隆项目通过科技成果鉴定

中国规模最大的一次克隆工程——体细胞克隆牛项目日前在新疆经过科技成果鉴定。

这项技术由中国科学院动物研究所、澳大利亚国际克隆公司和新疆金牛生物科学院一九九四年开始联合实施。至今，共生产克隆胚胎五百多枚，移植受体牛四百七十九头，成活十二头。这项技术的成功，标志着中国克隆技术达到了国际同类研究的先进水平，将对新疆乃至中国的牛品种改良带来一场革命。

关于克隆技术的资料

克隆是英文 clone的音译，简单讲就是一种人工诱导的无性繁殖方式。但克隆与无性繁殖是不同的。无性繁殖是指不经过雌雄两性生殖细胞的结合、只由一个生物体产生后代的生殖方式，常见的有孢子生殖、出芽生殖和分裂生殖。由植物的根、茎、叶等经过压条、扦插或嫁接等方式产生新个体也叫无性繁殖。绵羊、猴子和牛等动物没有人工操作是不能进行无性繁殖的。科学家把人工遗传操作动、植物的繁殖过程叫克隆，这门生物技术叫克隆技术。
克隆技术的设想是由德国胚胎学家于1938年首次提 出的，1952年，科学家首先用青蛙开展克隆实验，之后不断有人利用各种动物进行克隆技术研究。由于该项技术几乎没有取得进展，研究工作在80年代初期一度进入低谷。 后来，有人用哺乳动物胚胎细胞进行克隆取得成功。 1996年7月5日，英国科学家伊恩·维尔穆特博士用成年羊体细胞克隆出一只活产羊，给克隆技术研究带来了重大突破，它突破了以往只能用胚胎细胞进行动物克隆的技术难 关，首次实现了用体细胞进行动物克隆的目标，实现了更高意义上的动物复制。研究克隆技术的目标是找到更好的办法改变家畜的基因构成，培育出成群的能够为消费者提供可能需要的更好的食品或任何化学物质的动物。
克隆的基本过程是先将含有遗传物质的供体细胞的核移 植到去除了细胞核的卵细胞中，利用微电流刺激等使两者融合为一体，然后促使这一新细胞分裂繁殖发育成胚胎，当胚胎发育到一定程度后（罗斯林研究所克隆羊采用的时间约为 6天）再被植入动物子宫中使动物怀孕使可产下与提供细胞 者基因相同的动物。这一过程中如果对供体细胞进行基因改造，那么无性繁殖的动物后代基因就会发生相同的变化。培育成功三代克隆鼠的“火奴鲁鲁技术”与克隆多利羊技术的主要区别在于克隆过程中的遗传物质不经过培养液的培养，而是直接用物理方法注入卵细胞。这一过程中采用化学刺激法代替电刺激法来重新对卵细胞进行控制。1998年7月 5日，日本石川县畜产综合中心与近畿大学畜产学研究室的科学家宣布，他们利用成年动物体细胞克隆的两头牛犊诞生。这两头克隆牛的诞生表明克隆成年动物的技术是可重复的。
当苏格兰的罗斯林研究所1996年利用克隆技术克隆出小羊多利后，这一成果立即被誉为本世纪最重大的也是最有争论的科技突破之一。这一突破带来的好处是显而易见的。 利用这一技术可以在抢救珍奇濒危动物、复制优良家畜个体、 扩大良种动物群体、提高畜群遗传素质和生产性能、提供足量试验动物、推进转基因动物研究、攻克遗传性疾病、研制 高水平新药、生产可供人移植的内脏器官等研究中发挥作用。
在肯定了这种技术的正面作用的同时，人们更大程度上表示了对这种技术的担忧，他侨衔?绻?褂貌坏保?庵旨际蹩赡芏陨肪巢て诘牟涣加跋欤?恍┛蒲Ъ胰衔 果在畜牧业中大量推广这种无性繁殖技术，很可能破坏生态平衡，导致一些疾病的大规模传播；如果将其应用在人类自身的繁殖上，将产生巨大的伦理危机。
克隆羊多莉的身份被披露后，美国俄勒冈科学家也证实他们于1996年8月已经利用克隆胚胎培育出猴子；又有传说，比利时一医生已无意中克隆出一个男孩。尽管比利时科学家否认克隆人的报道，但是各国政府对克隆技术在法律 和伦理方面可能造成的影响非常重视，美、德、法、英、加 等国纷纷成立专家小组研究这一问题，科学家们也要求对这 一领域的研究加以限制。世界卫生组织总干事中岛宏和欧盟委员会负责科研的委员1997年3月11日分别发表声明 和谈话，表示反对进行人体克隆试验。目前各国对这项技术较为一致的看法是制定法律加强对这种技术的管理，并严禁用它复制人类。克隆出小羊多利的英国科学家维尔穆特也说， 用来克隆多利的那种技术效率极低，在他成功克隆出多利之前该技术曾导致先天缺损动物的出生。将这种技术用于人类 是“非常不人道的”。
中国政府也十分重视克隆技术及其提出的相关问题，国家科委和农业部等部门已多次召开有各方面专家参加的研讨、 座谈会，并就有关问题达成共识。专家们认为，动物克隆技术的成功是科学研究上的一个重大事件，它既有有益的一面， 又有不利的可能，必须采取措施加以规范，严格控制住有害的一面，使这项技术造福于人类。
1997年11月11日，联合国教科文组织第29届 大会在巴黎通过一项题为《世界人类基因组与人权宣言》的文件，明确反对用克隆技术繁殖人。文件指出，应当利用生物学、遗传学和医学在人类基因组研究方面的成果，但是， 这咱研究必须以维护和改善公众的健康状况为目的，违背人 的尊严的作法，如用克隆技术繁殖人的作法，是不能允许的。
1998年1月12日，欧洲19个国家在法国巴黎签署了一项严格禁止克隆人的协议(european protocol on banning human cloning)。这是国际上第一个禁止克隆人的 法律文件，是对《欧洲生物医学条约》的补充。这项禁止克 隆人协议规定，禁止各签约国的研究机构或个人使用任何技术创造与一活人或死人基因相似的人，否则予以重罚。违反协议的研究人员和医生将被禁止从事研究和行医，有关研究 所或医院的执照将被吊销。如果签约国研究机构或个人在欧洲以外地区进行这类活动也将追究法律责任。在协议上签字的国家有法国、丹麦、立陶宛、芬兰、希腊、爱尔兰、意大 利、拉脱维亚、卢森堡、摩尔多瓦、挪威、葡萄牙、罗马尼 亚、斯洛文尼亚、西班牙、瑞典、马其顿、土耳其和圣马力诺。

克隆技术的发展

克隆，是Clone的译音，意为无性繁殖，克隆技术即无性繁殖技术。前不久报道的英国罗斯林研究所试验成功的克隆羊多利，是首次利用体细胞克隆成功的，它在生物工程史上揭开了新的一页。
克隆技术已经历了三个发展时期：

第一个时期是微生物克隆，即由一个细菌复制出成千上万个和它一模一样的细菌而变成一个细菌群。

第二个时期是生物技术克隆，如DNA克隆。

第三个时期就是动物克隆，即由一个细胞克隆成一个动物。

在自然界，有不少植物具有先天的克隆本能，如番薯、马铃薯、玫瑰等插枝繁殖的植物。而动物的克隆技术，则经历了由胚胎细胞到体细胞的发展过程。早在本世纪50年代，美国的科学家以两栖动物和鱼类作研究对象，首创了细胞核移植技术，他们研究细胞发育分化的潜能问题，细胞质和细胞核的相互作用问题。1986年英国科学家魏拉德森首次把胚胎细胞利用细胞核移植法克隆出一只羊，以后又有人相继克隆出牛、羊、鼠、兔、猴等动物。我国的克隆技术也颇有成就，80年代末，我国克隆出一只兔，1991年西北农业大学发育研究所与江苏农学院克隆羊成功，1993年中科院发育生物研究所与扬州大学农学院共同克隆出一批山羊，1995年华南师大和广西农大合作克隆出牛，接着中国农科院畜牧研究所于1996年克隆牛获得成功。而美国最近克隆猴取得成功，日本科学家也声称他们繁殖出200多头“克隆牛”。以上所述的克隆动物，都是用胚胎细胞作为供体细胞进行细胞核移植而获得成功的。
1997年2月英国罗斯林研究所宣布克隆成功的小羊多利，是用乳腺上皮细胞作为供体细胞进行细胞核移植的，它翻开了生物克隆史上崭新的一页，突破了利用胚胎细胞进行核移植的传统方式，使克隆技术有了长足的进展。整个克隆过程如下：科学家选取了三只母羊，先将一只母羊的卵细胞中所有遗传物质吸出，然后将另一只6岁母羊的乳腺细胞与之融合，形成一个含有新遗传物质的卵细胞，并促使它分裂发育成胚胎，当这一胚胎生长到一定程度时再将它植入第三只母羊的子宫中，由它孕育并产下克隆羊多利。多利酷像提供乳腺细胞的6岁母羊。 小羊多利是世界上第一个利用体细胞克隆成功的动物。克隆多利的成功，从理论上说明了高度分化细胞，经过一定手段处理之后，也可回复到受精卵时期的合子功能；说明了在发育过程中，细胞质对异源的细胞核的发育有调控作用。它对生物遗传疾病的治疗、优良品种的培育和扩群等提供了重要途径，对物种的优化、濒危动物的种质保存，对转基因动物的扩群均有一定作用。 自克隆小羊多利成功后，世界各国引起强烈的反响，有的看作福音，有的则视为祸水，笔者以为对新技术应采取支持态度，生物克隆取得突破，最大的好处是培养大量品质优良的家畜，丰富人们的物质生活，使畜牧业的成本降低，效率提高，还可提供某些药物原料以提高人类免疫功能等等。在小羊多利之前，罗斯林研究所曾培育出一只奶中含治疗血友病药物原料的转基因羊，一家公司以50万英镑的高价买去。如果利用体细胞大批“复制”这只羊，就可挽救更多患者的生命。另外，利用克隆技术可以大量复制珍稀动物，挽救濒危物种，调节大自然的生态平衡，为人类造福，何来忧患呢?当然，克隆技术也可能带来负面影响，一些克隆动物在遗传上是全等的，一种特定病毒或其它疾病的感染，将会带来灾难，如果无计划克隆动物，会扰乱物种的进化规律，干扰性别比例，这种对生物界的人为控制会带来许多意想不到的危害。但只要采取相应的研究对策，制订科学的克隆计划，这种负效应就可以避免。
至于克隆人，这是一个没有意义的研究课题，当代生物史证明，克隆技术只能复制出外貌特征相同的生物，不能克隆出被复制者原有的才能。人的思想才能受后天的制约。所以，即使有人能克隆出酷似历史上的伟大领袖、伟大科学家那样的人物，也仅在外貌上相同，却缺乏伟大领袖、伟大科学家那样的思想、气质、才能，试问这样的克隆具有什么意义?至于有人主张克隆人以取得人体器官，用于医学上人体器官的移植，这也是不可行的。因为克隆出来的人首先是一个公民，他享有人权，如果克隆人不肯捐赠器官，你发明者也不能侵犯人权。 至于克隆无头的人，那也是不现实的，因为克隆人要生存，首先要吃饭，要思维，没有头颅是不可能的，我们总不能培植一个无头的植物人吧?而且，最重要的是克隆人不符合世情国情，当今世界人口急剧膨胀，不少国家已实行计划生育，控制人口增长，在这种情况下怎么拆巨资做违背社会发展规律的事呢?正如德国研究技术部长吕特格斯所说：“复制人类将不被允许，也一定不会发生。” 目前，克隆技术在英国又有了新的进展，他们把这一技术应用于人类造血事业。英国的PPL公司是克隆技术的经济后台，它的主管罗思詹姆斯博士说：“从研究多利中我们知道，我们可以用一个细胞制造出一只转基因动物。我们现在正利用这一技术生产人类血液中最重要的组成部分，也就是血浆。”他们与罗斯林研究所合作研究一种带有人类基因的牛和羊。他们先把动物体内的血浆取出，再取代人类的血浆，这种改变了基因的牛和羊体内就含有人类血浆的重要成分，通过对这些动物的饲养、再克隆或繁殖，就可以得到稳定可靠而且相对便宜的血资源，据统计在英国每年价值可达150英镑。可谓效益匪浅。 克隆技术的前景不可估量。
参考资料：/(中国科森植物克隆网

关于异种体细胞克隆和体细胞克隆的应用价值

我国头体细胞克隆猪诞生 有助人类异种器官移植

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2005年08月09日 09:10TOM.COM

2005年08月09日07时57分 来源:北京青年报曾伟 周春林
本报讯 记者昨天从有关部门获悉，我国第一头体细胞克隆猪在中国农业大学诞生。
8月5日上午10时50分，一头健康活泼的小香猪在河北省三河市顺利诞生。经权威鉴定确认为克隆后代。这是我国独立自主完成的首例体细胞克隆猪，填补了我国在这一领域的空白。
在国家重点基础研究发展规划“973”项目以及北京市自然科学基金资助下，李宁教授领导的课题组经过一年多的科技攻关，终于在8月5日这一天获得回报。
据悉，此次克隆猪供体细胞来自于我国地方优良猪种———香猪的胎儿，受体卵母细胞来自屠宰母猪的卵巢。将实验室构建的克隆胚植入母猪体内，经116天的发育后问世，共产下3头小猪。
其中存活一头，体重1130克，目前健康状况良好。
据专家介绍，开展猪的体细胞克隆具有极其重要的意义，在医学上可以为人类异种器官移植研究以及疾病模型研制提供理想的材料，在农业上可以丰富地方猪品种改良以及地方优良猪种保种的手段。猪的体细胞克隆难度比牛、羊大，此前仅有英国、日本、美国、澳大利亚、韩国及德国获得过猪的体细胞克隆后代。此次首例体细胞克隆香猪的诞生，表明我国在此项研究上已经进入国际先进水平行列，同时将为我国深入开展异种器官移植、优质猪培育以及地方良种猪保种等研究工作打下基础。
此前，由李宁教授率领的课题组，对加拿大赠送的一头种公牛“龙”的体细胞克隆进行了系统的研究与试验，取得突破性进展。去年3月11日和17日克隆成功“大隆”、“二隆”。
中国“异种体细胞克隆之父”陈大元
【字体：大 中 小】www.ebiotrade.com时间：2005年08月26日来源：生物通
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摘要：

生物通报道：2005年8月24日，中国科学院动物研究所陈大元教授透露，国际首例体细胞克隆亚洲黄羊日前在山东顺利降生。

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这是世界上首次用山羊克隆出亚洲黄羊。科研人员在亚洲黄羊克隆研究中大胆创新，采用了卵母细胞末期去核结合胞质内整个体细胞直接注射的新方法，大大提高了克隆效率。这项克隆的成功不仅证明成年亚洲黄羊的成纤维体细胞能在异品系的普通山羊的去核卵母细胞胞质中去分化、恢复全能性，而且还表明普通山羊的卵胞质可以“指令”亚洲黄羊的体细胞核发育，并能“指导”异品种重构胚胎在普通白山羊、黑山羊、奶山羊受体子宫中着床、妊娠、分娩完成全程发育。

陈大元（Chen Dayuan），男，江苏吴县角直镇人，1933年4月14日生，1957年毕业于山东大学生物系胚胎专业，师从童第周教授和张致一教授，现为中国科学院动物研究所生殖生物学国家重点实验室首席研究员，博士生导师和受精生物学学科带头人，1984年从美国IOWA大学医学院回国后，长期从事受精机理、显微受精和动物克隆研究。现为国家科技部“克隆大熊猫研究”攀登专项的首席科学家、国家自科科学基金委“家畜体细胞无性繁殖（克隆牛）研究”重点项目的首席科学家、中国科学院“异种克隆大熊猫研究”知识创新工程重大项目的课题主持人和“973”“异种克隆中线粒体命运研究”及“‘治疗性克隆’灵长类动物模型的建立”课题的负责人。

1997年，在震惊世界的“多利”羊出生一个月后，陈大元教授等人提出了异种克隆，即把A种动物体细胞的细胞核移植到B种动物的去核卵母细胞中，让B种动物生出A种动物。

2002年，陈大元教授领导的课题组与山东曹县五里囤合作用体细胞克隆出了牛犊。经微卫星分析证明，所有克隆牛犊DNA与供核体细胞一致，而与代孕受体母牛无关。这是我国利用成年母牛和公牛的成纤维细胞作为核供体首次获得的克隆牛犊，实现了我国成牛体细胞克隆牛成活群体零的突破。

陈大元教授对保护濒危动物不遗余力，他是我国克隆大熊猫专项首席科学家，在大熊猫克隆方面取得了重要成果。由于濒危动物克隆实验无法由这些动物本身完成，只能借腹怀胎，用别的动物替代。为此，陈大元教授于1997年3月率先提出了“克隆大熊猫”的设想，福州大熊猫研究中心率先与陈大元教授就此项研究开展全面合作。

这位深钻克隆技术的老科学家为人谦虚，他并不是独尊克隆的“学霸”。他认为，只要能拯救濒危生物，无论什么方法都值得一试，而克隆只是其中的一种方法。（生物通记者杨遥）
体细胞克隆非常重要，因为性细胞或胚胎细胞的形成都有时间限制、有数量限制；性细胞的形成要通过一个减数分裂过程，在这—过程中，遗传信息要发生分离和自由组合，从而造成每个性细胞中的遗传信息不尽相同，如果直接用性细胞进行克隆工作，就会造成每个克隆个体都不相同。

一个优良的个体，它的体细胞数量巨大，而且还可以利用细胞培养的方法进行离体的体细胞培养。因此，动物体细胞的获得不会受到时间和数量的限制。最重要的是同一个个体的所有体细胞都具有同样的遗传信息。

如果用体细胞来直接繁殖后代，不仅可以保证每个克隆个体具有相同的优良性状，而且可以使“复制”出的个体数量巨大。尽管动物体细胞的全能性已经丧失，但是科学家们仍然孜孜不倦寻求全能性恢复的条件，并且最终获得了成功。

动物体细胞克隆可以复制出的数量巨大的优良个体，因此动物克隆技术可以首先应用于畜牧业育种上；其次，如果将个体克隆技术用于能够生产特殊医药蛋白的转基因动物，将会产生巨大的经济效益；在理论上直接利用个体克隆技术可以研究细胞发育过程中不同基因的表达规律和调节控制机理，这将对细胞发育生物学的发展产生重要的影响；建立起稳定的动物模型，利于研究人类疾病的发病机理，揭示基因结构和功能间的关系，揭示生命的本质；利用动物克隆技术可以获得足够量的动物器官用于人类器官移植，而不必再利用人的器官，这将拯救许多人的生命；动物克隆技术还可用于延缓珍稀濒危动物的灭绝。我国受乙肝困扰的人数与日俱增，而针对乙肝的药物和治疗方法亦是层出不穷。从目前来看，这些方法都在抑制病毒复制方面用力，对缓解病情起到了一定的作用，但如何打破药物的瓶颈、从本质上解决乙肝的治疗难题一直是众多医学家所追求的目标。随着生物免疫学的发展，细胞治疗技术揭开了崭新的一页，使乙肝在诊断上和治疗上都提升到一个新的高度。伴随我国高标准、大规模肝病体细胞培养室在261医院成功应用，标志着中国在治肝技术上取得突破性进展。北京261医院生物诊断与治疗中心成功开展的高科技细胞治疗乙肝技术，帮助国内众多通过常规方法治疗多年仍无效果的乙肝患者获得了有效治疗。据了解，已有数十家国内知名国有医院的专家前来进行学术交流活动，为我国体细胞治疗乙肝技术的进一步发展起到了积极的推动作用。

我国慢性乙肝病人有近3000万，其中，大部分患者长期不能得到有效治疗主要因为产生耐药和免疫受损，细胞治疗技术正是对这两种难题进行有效解决。而采用全面和精确地检测方法是治疗乙肝的关键途径。

■精确检测才能避免盲目治疗

乙肝有ABCDEF等几种病毒基因型，而且病毒基因是否变异，患者个体的差异很大，且变异的区域和点位也各不相同，所以体细胞治疗中，要进行“高通量基因变异和生物芯片检测”，仅仅做乙肝两对半和HBV-DNA检测对已经发生病毒变异的检测是不全面的。如C区发生基因变异的大三阳患者E抗原检测不出，可能检测为小二阳，而且使用干扰素无效；而P区的变异多为长期服用核苷类药物所致，继续服用可导致病情加重；X区变异的患者极易发生爆发性肝炎、肝硬化和肝癌。这些情况均可能对病情的了解产生偏差；为此，该项技术专门建立了全方位病毒基因检测系统，能够精确地发现变异病毒，为准确治疗提供了保障。

■体细胞技术用自己的细胞治自己的病

体细胞技术不用药物，也不用手术，它是通过高科技的细胞采集设备，将患者血液中不健全的免疫细胞提取一些，提取后通过在细胞室培养，使这些细胞发育成健康、成熟的细胞，恢复其对乙肝病毒的杀伤功能，然后将这些强有力杀灭乙肝病毒的细胞成百倍增殖，这就如同建立了一个杀灭乙肝病毒的部队，再将这些细胞回输到患者体内，杀灭血液及肝细胞内的病毒。而且这些细胞在体内能多年存活，为防止再感染提供了长期保护。

细胞治疗技术是国际公认的最具应用前景的治疗方法，临床显示，细胞治疗技术在杀灭乙肝病毒、血清转换时间周期短，在阻断病程向肝硬化、肝癌发展方面效果明显

体细胞克隆所遇到的难题，科学家是如何克服走向成功的

由山东干细胞工程技术研究中心李建远教授率领的科研团队，近日成功克隆出5枚符合国际公认技术鉴定指标的人类囊胚，这标志着中国已经掌握世界尖端的人类胚胎克隆技术，人类体细胞核移植克隆技术达到国际领先。

专家说，这项研究将给糖尿病患者、老年痴呆患者、帕金森病患者等带来福音，今后人类用药物或手术无法治疗的疾病有望得到救治。

李建远教授的研究团队通过采用先进的三维立体偏震光纺锤体成像系统，对卵母细胞的细胞核精确定位后，再用微激光对卵子的透明带打孔，精确剔出卵子细胞核，再将人类成细胞的细胞核成功移植进去，通过电激活与化学激活两种手段，成功获得了5枚囊胚，并顺利通过线粒体DNA、SNP鉴定，标志着人类体细胞克隆胚胎获得成功。

据介绍，该成果除了使用人体成纤维体细胞获得克隆胚胎外，还在世界首次应用帕金森病患者外周血的淋巴细胞作为供体细胞获得囊胚，这使利用克隆技术治疗疾病向前迈进一大步。

据介绍，成功掌握人类体细胞移植克隆技术，就可以从胚胎中提取到与病人遗传基因完全相同的全功能胚胎干细胞，用它衍生出全新的组织或器官，来取代病变的细胞、组织、器官，就可以避免免疫排异反应的发生，从根本上解决组织器官移植中的配型困难与供体不足等瓶颈问题，攻克糖尿病、白血病、癌症等很多目前不能治疗的疑难性疾病。

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