HLA-Ⅱ类基因与狼疮性器官的系统损害的相关性研究

摘　要　目的　分析HLA-Ⅱ类基因与狼疮性器官、系统损害的相关性，探讨系统性红斑狼疮(SLE)从基因到临床表达的发病机制。方法　应用PCR-SSOPH技术检测113例确诊SLE病人的DR、DQA1、DQB1等位基因。结果　浆膜炎与DQB1*0601正相关；神经精神症状与DRB1*1501正相关；血肌酐增高与DQB1*0302、DQB1*0401正相关；血尿素氮增高与DQB1*0201负相关；蛋白尿与DQB1*0301、DRB3*0202、DRB3*0301、DRB1*1101负相关；血尿与DQB1*0301、DRB3*0301负相关；管型尿与DRB1*0302正相关；贫血和白细胞减少分别与DQB10201正相关；血小板减少与DRB1*1502和DRB1*1202正相关；淋巴细胞减少与DRB1*0302正相关；C3降低与DQB1*0303正相关，与DQB1*0301负相关；狼疮细胞阳性与DRB1*1501负相关。结论　多个HLA-Ⅱ类等位基因和SLE的临床表达有相关性，国人的SLE遗传背景与其他人种有所不同。

关键词：红斑狼疮，系统性；HLA抗原；多态现象(遗传学)；易感性与特异性；等位基因

系统性红斑狼疮(SLE)发病与多种HLA等位基因相关。为深入探讨这些基因或其关联的亚型与SLE临床表达关系，我们引入PCR-SSOPH检测技术，对113例确诊的SLE病人进行HLA-DR、DQ位点等位基因分型，分析基因与狼疮性器官、系统损害的相关性，找出重型SLE相关基因。

1　资料与方法

1.1　病例选择：入选的113例患者均符合1982年美国风湿病协会(ARA)SLE诊断标准4条或4条以上［1］。记录患者的性别、发病年龄，以及有无以下SLE临床表现：蝶型红斑、盘状损害、光敏、口腔溃疡、关节炎、雷诺现象、狼疮发、神经精神症状、浆膜炎、血细胞减少、狼疮肾炎和C3降低(＜0.8g/L)等。

标本：外周静脉血5ml(抗凝)。

1.2　实验方法：①基因组DNA的提取：盐析法。②DNA体外扩增—聚合酶链反应(PCR)。共有6对引物，其中AMP-B为DR位点扩增的公用引物。③地高辛(DIG)—ddUTP3′末端标记寡核苷酸探针杂交。

1.3　分型标准：以显著影响生存率的恶性指标作为重型SLE分型标准［2］。

1.4　统计学处理：χ2相关分析、多因素回归分析和多项比较校正，以P＜0.05为具统计学显著性。

2　结

果

2.1　HLA-Ⅱ类基因分型

2.1.1　等位基因分型结果：用12个DQA1探针检出7个亚型，未检出DQA1*0401；用15个DQB1探针检出12个等位基因，未检出DQB1*0504、*0603和*0604；用4个DR2探针检出4个亚型：用4个DR52组探针检出3个亚型，未检出DRB3*0201；用8个DR52相关组探针分出8个亚型。

2.1.2　H-W吻合度检测结果：在HLA-DQA1和DQB1座位上，基因型的期望值与观察值很好吻合，分别P＞0.1和P＞0.5，说明基因已达到遗传平衡，本组病人可作为可靠的供研究的群体资料。

2.2　HLA-Ⅱ类等位基因与SLE器官、系统损害的相关性(见表1)

2.2.1　HLA-DQA1位点等位基因：DQA1*0101与淋巴细胞减少正相关；DQA1*0102与狼疮细胞阳性负相关；DQA1*0501与蛋白尿负相关，Pc(多项比较校正P值)＞0.05。

2.2.2　HLA-DQB1位点等位基因：HLA-DQB1*0201与贫血和白细胞减少正相关，与血尿素氮增高负相关；DQB1*0302与血肌酐增高正相关；DQB1*0303与C3降低正相关；DQB1*0401与血肌酐增高正相关；DQB1*0602与发病年龄正相关，均分别P＜0.05，Pc＞0.05。

DQB1*0301分别与蛋白尿和血尿负相关，分别P＜0.001和0.01，分别Pc＜0.05和Pc＞0.05；与C3降低负相关，分别P＜0.05和Pc＞0.05。DQB1*0601与浆膜炎正相关，分别P＜0.01，Pc＜0.05。

2.2.3　HLA-DR2组等位基因：DRB1*1501与神经精神症状正相关，与狼疮细胞阳性负相关；DRB1*1502与血小板减少正相关，均分别P＜0.05，Pc＞0.05。

2.2.4　HLA-DR52组等位基因：DRB3*0202与蛋白尿负相关；DRB30301与蛋白尿和血尿均呈负相关，均分别P＜0.05，Pc＞0.05。

2.2.5　HLA-DR52相关组等位基因：DRB10302与淋巴细胞减少和管型尿正相关；DRB1*1101与蛋白尿负相关；DRB1*1202与血小板减少正相关，均P＜0.05，Pc＞0.05。

表1　HLA-DR和DQ等位基因与SLE临床指标的相关性

等位基因 临床指标 N1/N2N3/N4χ2值 P值 Pc值

DQA1*0101淋巴细胞减少10/6416/49　4.450.03＋ ＞0.05

DQA1*0102狼疮细胞阳性15/25　2/11　8.040.013－ ＞0.05

DQA1*0501蛋白尿19/69　5/44　4.200.04－ ＞0.05

DQB1*0201贫血

5/5118/62　6.380.01＋ ＞0.05

白细胞减少

8/6515/48　6.110.01＋ ＞0.05

尿素氮增高16/51　1/11　7.000.03－ ＞0.05

DQB1*0301蛋白尿27/69　3/4414.390.0001－ ＜0.01

血尿29/90　1/23　7.300.007－ ＞0.05

C3降低20/51　9/55　7.660.02－ ＞0.05

DQB1*0302血肌酐增高 　7/554/7　8.840.01＋ ＞0.05

DQB1*0303C3降低10/5117/55　8.500.01＋ ＞0.05

DQB1*0401血肌酐增高 　1/552/7　8.810.01＋ ＞0.05

DQB1*0601浆膜炎21/99　8/14　8.300.03＋ ＜0.05

DRB1*1501CNS损害19/99　5/13　6.030.049＋ ＞0.05

狼疮细胞阳性11/25　0/1110.960.01－ ＞0.05

DRB1*1502血小板减少 　0/55　6/58　6.010.01＋ ＞0.05

DRB3*0202蛋白尿19/69　3/44　7.360.007－ ＞0.05

DRB3*0301蛋白尿12/69　2/44　4.080.04－ ＞0.05

血尿14/90　0/23　4.080.04－ ＞0.05

DRB1*0302淋巴细胞减少 　1/64　5/49　4.120.04＋ ＞0.05

管型尿 　4/1042/9　5.560.02＋ ＞0.05

DRB1*1101蛋白尿11/69　1/44　5.290.02－ ＞0.05

DRB1*1202血小板减少 　0/55　5/58　4.960.03＋ ＞0.05

注：N1：等位基因阳性＋临床指标阴性数，N2：临床指标阴性数，N3：等位基因阳性＋临床指标阳性数，N4：临床指标阳性数，－：负相关，＋：正相关

此外，本研究尚发现HLA-Ⅱ类基因与多种自身抗体显著关联，但与性别、蝶型红斑、盘状损害、光敏、口腔溃疡、关节炎、雷诺现象和狼疮发无显著相关。

2.2.6　多因素回归分析：结果表明等位基因相互间存在复杂的交互关系，DQB1*0401和DQB1*0605分别与血肌酐增高和蛋白尿正相关，分别P＜0.05。

3　讨

论

为探讨基因与SLE临床表达关系，找出重型SLE相关基因，我们进一步分析了HLA-Ⅱ类基因与狼疮性器官、系统损害的相关性。

3.1　肾脏损害：Fronek等［3］报道DR2与狼疮肾炎相关，还发现稀有等位基因DQB1*0605、*0502与白人、黑人和亚洲人狼疮肾炎显著相关，此相关在亚洲人最显著。Doherty等［4］报道了对南方中国人SLE的研究结果：与健康对照组比，DRw15和DQw1在狼疮肾炎组频率显著增高：与非狼疮肾炎组比，频率无明显增高；王敏等［5］报道，DR2和DR9同时阳性可致狼疮肾炎风险性明显增高；彭学标等［6］的研究结果也表明DR2阳性与江苏地区汉族人SLE肾损害相关；但未见分析DR2亚型相关性的报道。我们的研究结果提示DQB1*0401和DQB1*0302均与血肌酐增高相关；其中DQB1*0401经多因素回归分析保持显著意义，因此是较为肯定的重型SLE相关基因；此外，单因素分析结果未显示DQB1*0605与肾损害相关，但多因素回归分析结果显示其与蛋白尿关联；由于DQB1*0605是稀有基因，显然不能用它解释SLE患者如此高的肾炎发生率；推测DQB1*0605与其他更重要的关联基因一起介导狼疮性蛋白尿的发生与发展。我们的研究未发现单位点DR2等位基因与肾损害关联，它们是否通过与其他基因的组合而致肾炎易感，有待进一步研究。

本资料还显示DQB1*0303与C3降低正相关。C3在自身免疫反应过程中起关键性作用，对肾炎的发生与发展尤为重要，早期C3降低是独立影响SLE病人预后的恶性因素［2］。因此DQB1*0303是个重要的SLE相关基因，值得进一步探讨它对SLE的标记性。

本研究发现某些等位基因对狼疮肾炎具有保护性，包括DQB1*0201和*0301，分别与血尿素氮和蛋白尿负相关；其中DQB1*0301还与恶性指标C3降低负相关；文献［7］报道DQB1*0301与SLE易感相关，但它可能是中国南方汉族人轻型SLE相关基因。

此外，DRB3*0202(DRw52b)、*0301(DRw52c)也与蛋白尿负相关。这与Reveille等［8］报道的美国黑人DRw52b与狼疮肾炎高风险关联相反。这种差异显然与人种的遗传背景有关。我们推测DR52组等位基因单独不能决定狼疮肾炎，但它们与重要的狼疮肾炎相关基因呈连锁不平衡，通过组合而呈现不同的功能：与致肾炎基因连锁，功能显示致病性；与保护性基因连锁，显示保护性。

孟炜等［9］报道DQA1*0501是SLE的保护基因，本资料也提示DQA1*0501与狼疮肾炎低风险相关。这与国外报道DQA1*0501为SLE易感基因不一致。

我们先前生存率的研究结果显示男性是独立影响SLE病人预后的恶性因素，男性比女性更多出现管型尿［2］。但本研究未发现HLA-Ⅱ类基因在男女性之间的分布有差异。在鼠狼疮，Yaa基因(Y染色体自身免疫反应促进基因)可显著加速狼疮易感鼠发病［10］，且狼疮肾炎严重；在人狼疮，是否存在具有类似功能的基因，值得深入探讨。

3.2　中枢神经系统损害：本研究发现DRB1*1501与SLE患者的神经精神症状正相关，这在国内外未见有报道。Reveille等［8］的研究结果提示3.7kb I DQαRFLP片断与黑人SLE的神经精神症状负相关，并推测具有保护功能的序列在DQα分子链上。本研究结果未能支持这一论点。

3.3　血液系统损害：DQA1*0101与淋巴细胞减少相关，未见其他可比性资料供讨论。DQB1*0201与贫血和白细胞减少关联。值得注意的是DQB1*0201同时与血尿素氮增高呈强负性关联，表明该基因主要引起血液系统损害。临床上某些SLE病人以血液系统受累为主要表现，如严重贫血、血小板减少等，而其他系统损害轻或无，可能与携带DQB1*0201基因型有关。

3.4　浆膜炎：本研究结果显示DQB1*0601与浆膜炎正相关，是重型SLE相关基因。文献［1］报道DQB1*0601是SLE易感基因。

本文研究分析HLA-Ⅱ类基因与狼疮性器官、系统损害的相关性，发现DR和DQ位点均有多个等位基因与SLE临床指标关联，部分显示易感性，部分显示保护性。结果对区分SLE临床亚型，早期预测SLE发展趋势具有一定的参考意义。研究结果表明，重型SLE相关基因主要为DQA1*0101、DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0303、DQB1*0401、DQB1*0601和DRB1*1501，对SLE具有保护性作用的基因包括DQA1*0501、DQB1*0301、DRB3*0202和DRB3*0301等。

谢尚葵现为美国德克萨斯大学西南医学中心风湿病科博士后

作者单位：谢尚葵(200040上海医科大学华山医院皮肤科)

冯树芳(200040上海医科大学华山医院皮肤科)

沈福民(上海医科大学公共卫生学院遗传流行病学教研室)

参考文献

1.Tan EM,Cohen AS,Fries JF,et al.The1982revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum,1982,25:1271-1277.

2.谢尚葵，冯树芳，傅华.系统性红斑狼疮病人生存率的研究.中华医学杂志，1995，75：617-620.

3.Fronek Z,Timmerman L,Alper C,et al.Major histocompatibility complex genes and susceptibility to systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum,1990,33:1542-1553.

4.Doherty DG,Ireland R,Demaine AG,et al.Major histocompatibility complex genes and susceptibility to systemic lupus erythematosus in Southern Chinese.Arthritis Rheum,1992,35:641-645.

5.王敏，董怡，黄尚志，等.中国汉人HLA-DRB1及TNF-α基因多态性与SLE遗传易感性的研究.见：中华医学会风湿病学学会.中华医学会第五次全国风湿病学学术会议论文集.北京：中华医学会风湿病学学会，1996.46-52.

6.彭学标，徐文严，岳晓玉，等.江苏籍汉族系统性红斑狼疮与HLA-DR基因的相关性研究.中华皮肤科杂志，1997，30：7-9.

7.Arnett FC,Olsenml,Anderson KL,et al.Molecular analysis of major histocompatibility complex alleles associated with the lupus anticoagulant.J Clin Invest,1991,87:1490-1495.

8.Reveille JD,Schrohenloher R,Acton RT,et al.DNA analysis of HLA-DR and DQ genes in American black with systemic lupus erythematosus.Arthritis Rheum,1989,32:1243-1251.

9.孟炜，沈福民，秦万章，等.中国南方汉族人群HLA-DQA1基因与系统性红斑狼疮易感性分析.中华医学遗传杂志，1994，11：325-328.

10.Izui S,Iwamoto M,Fossatl L,et al.The Yaa gene model of systemic lupus erythematosus.J Immunol,1995,144:137-153.

11.张咸宁，潘新华，朱定良，等.中国南方汉族人群HLA-DQB1基因对系统性红斑狼疮的易感性研究.中国免疫学杂志，1997，1：37-39.

本文地址:http://www.dadaojiayuan.com/zhongyizatan/62258.html.

声明： 我们致力于保护作者版权，注重分享，被刊用文章因无法核实真实出处，未能及时与作者取得联系，或有版权异议的，请联系管理员，我们会立即处理，本站部分文字与图片资源来自于网络，转载是出于传递更多信息之目的,若有来源标注错误或侵犯了您的合法权益，请立即通知我们(管理员邮箱：602607956@qq.com)，情况属实，我们会第一时间予以删除，并同时向您表示歉意,谢谢!

上一篇: 生物医学工程回顾与展望

下一篇: 腰椎间盘突出症胶原酶治疗进展